【ISCO】反相RediSep®柱在肽别离中的运用与优化

　　肽能够被界说为氨基酸的短链聚合物。单个肽的特性当然取决于其特定的氨基酸组成和摆放办法。肽具有相对的极性，其结合特性与其他蛋白质适当共同。

　　肽混合物能够被别离成单个肽品种。若能将这些独自且更详细的肽包含在一个单一的馏分中，这将极大地加快许多科学进程。

　　以下是一个通用的办法，用于在可重复运用的反相RediSep®C18柱大将肽混合物别离成馏分。

　　一般最好从4.3克的RediSep反相柱开端。在探究特定肽的杰出参数时，会运用较少的肽样品和溶剂。一旦确认了洗脱参数，就能够精确的经过需求扩展进程规划。回忆反相理论的运用阐明AN10或许是有利的。

　　关于本参阅文献中运用的特定肽混合物，参数列于表1中。参数将随肽结构而改动。

　　抱负的波长会依据肽的结构而改动。挑选具有最高灵敏度的波长是抱负的，一起防止引进过多噪声或遗失某些化合物。假如210 nm过于喧闹，那么214 nm一般会供给一个更洁净的基线 nm处吸收最好，双键在254 nm处，单键在210 nm处。引荐的通用波长关于蛋白质和肽是210 nm。

　　荷离子。这有助于供给更均匀的别离，然后改进柱功能。常用的反荷离子是0.1%（体积比）三氟乙酉夋（TFA）。将其等量添加到A和B移动相中。在整个别离进程中保持稳定反荷离子浓度会得到更共同的基线。简略的制造办法是每升移动相中参与1毫升（0.1% v/v）。直接用移液管将TFA参与到移动相中并彳切底混合。

　　C18。3.移动相是流过支撑介质的流体，以便将肽的活性部分露出给固定相。

　　上，常常要一个强梯度来洗脱。典型地，水用作溶剂A，乙腈用作溶剂B来洗脱肽。

　　到95% B溶剂的十分缓慢的梯度，以保证一切峰都被洗脱而且柱子被清洁。在初始的

　　梯度运转后，洗脱概括大致确认，能够精确的经过特定肽的需求修正梯度。经过在特定的保存时刻改动梯度的斜率，能够优化别离时刻和峰形。

　　供给了一个参阅肽的色谱图。特定的肽是运用表1中列出的参数进行别离的。参数将跟着肽的结构而改动。

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